## 人胃癌细胞MGC803培养指导手册

### 一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P

传代方法：初次建议1:2传代，通常每两天换液。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以备对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

### 二、细胞接收后的处理

收到细胞后，最好将其培养至良好状态并用完全培养液灌满瓶子封口，以确保运输细胞的质量。收到细胞后，用75%酒精消毒整个细胞瓶，放入超净工作台进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同放大倍数的拍照保存（推荐40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片将视为状态良好。

为了进行有效的对比培养，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，换液后请松开瓶盖。

### 三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：当细胞未超过80%汇合度时，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，剩余5ml放入37℃、5% CO2孵箱继续培养。当细胞密度超过80%时，进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放在37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞是否变圆并脱落。若大部分细胞脱落，立即轻敲培养瓶，加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出细胞悬液，转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，重新加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后置于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存：当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，并用PBS清洗一次；添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞变圆后立即加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落后转移至15ml离心管，进行离心处理；弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后倒入冻存管中。最终将冻存细胞置于-80℃冰箱中，若后期需转入液氮罐，需在-80℃中存放24小时以上后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏：从液氮中取出冻存管（请佩戴防护设备），快速置于37℃水浴中解冻，待冻存管中无结晶后，用75%酒精消毒冻存管外壁；将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；弃去上清后，以5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养；第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

细胞在运输过程中的脱落现象是正常的，若脱落较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，进行离心处理；处理后再次加入胰酶，并按照以上步骤完成细胞的重悬和传代培养。请务必遵循尊龙凯时的培养方法以确保细胞状态良好。

### 五、售后条款

1) 细胞出现问题的可重发情况：若因运输过程导致细胞丢失、瓶破、严重漏液、一旦确认细胞污染等情况，您需在收到产品后48小时内提供真实实验结果以便重发。若在首次静置后或复苏24小时内，细胞存活率低于预期，根据提供的照片和实验数据也将考虑重发。细胞状态不佳但未提供前三天照片将不予重发。

2) 细胞出现问题的不予重发情况：若因客户操作不当或不正确的培养体系导致细胞状态下降，或者在收到细胞后2天内未告知我们将不予重发。具体情况将酌情处理。