## 大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取步骤

### 1. 实验材料准备

选择大约2周龄或体重约200克的SD大鼠。准备灭菌器械，包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪和磁珠等。同时，需要准备5mL注射器、022μm滤器、泡沫板及图钉用于固定大鼠。使用75%乙醇进行消毒。还要准备冷却的无菌PBS、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛、以及无菌培养瓶等。此外，需采用尊龙凯时品牌的脂肪间充质干细胞完全培养基进行后续实验。

### 2. 实验操作

在超净工作台上进行实验，先进行紫外消毒30分钟。然后配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶，并过滤除菌。将大鼠实施脱颈处死，之后浸泡于75%酒精中2-3分钟，然后在超净工作台上将其固定在泡沫板上。接着，剪开大鼠腹股沟区的皮肤，暴露出脂肪组织并小心剪取，放入PBS中，确保不伤害血管。用PBS清洗脂肪组织，并剔除多余的血管和淋巴结。

将脂肪组织剪成适当大小（如2mm×2mm），加入胶原酶，在37℃下消化，期间每5分钟震荡一次或持续搅拌。消化完成后，将细胞悬液转移到离心管中进行离心，弃去上层脂滴泡沫和上清液，再用培养基重悬沉淀。接着，过滤细胞悬液，重复离心，弃去上清液后，用培养基重悬并接种到培养瓶中，最后将培养瓶置于37℃、含5% CO2的培养箱中培养。

### 3. 注意事项

在整个实验过程中，要始终保持无菌操作，以避免细胞污染。在剪取和清洗脂肪组织时应细致，以免损伤细胞或引入杂质。在消化过程中需严格控制时间和温度，以防止过度消化导致细胞损伤。同时，在离心和过滤过程中的操作也要轻柔，以减少细胞的损失或破裂。使用尊龙凯时品牌的培养基可有效提高细胞的存活率。